用途:CRM-ATX是一種校準溶液認證的參考物質(CRM),設計用于ATX-a的分析方法開發和準確定量。CRM濃度使其適用于制備稀釋系列,用于儀器校準,如通過紫外吸收(LC-UV)、熒光(LC-FL)或質譜(LC-MS)檢測的液相色譜法,以及用于加標回收實驗的對照樣品。
制備:ATX-a是從Aphanizomenon issatschenkoi的藻類培養物中分離出來的[3]。從細胞中提取毒素,通過色譜純化,然后真空干燥成無水形式[4,5]。CRM溶液通過將純化的ATX-a溶解在用0.01%乙酸脫氣的甲醇/水(9:91,v/v)中來制備。在氬氣下,用涂有聚四氟乙烯的攪拌棒和磁力攪拌器將溶液充分混合。將等分試樣分配到預先填充氬氣的琥珀色玻璃安瓿中,然后立即對其進行火焰密封。每個安瓿含有大約0.5毫升溶液。
結構確認和純度評估:
通過以下技術檢查毒素的純度:500 MHz 1H NMR光譜、LC-MS[6]、LC-UV、毛細管電泳紫外檢測(CE-UV)[7]和液相色譜化學發光氮檢測(LC-CLND)[8]。通過核磁共振波譜[9]和四極飛行時間(QToF)質譜法證實了ATX-a的分子結構。ATX-a的1H NMR光譜如圖1所示。在166.12269 Da處獲得了[M+H]+離子的準確質量,其在166.12264 Da的理論單同位素質量的0.05 mDa(Δ=
0.30ppm)。還獲得了[M+H]+離子的串聯質譜,如圖2所示。使用NMR、LC-MS、LC-UV和LC-CLND來估計ATX-a的純度。沒有觀察到主要雜質。
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